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DNA基因合成儀反應步驟

發布時間:2021-12-18      點擊次數:785
  基因合成是用人工方法合成基因的技術,是基因獲取的手段之一,相對于從已有生物中獲取基因來說,基因合成無需模板,因而不受基因來源限制?;蚝铣捎袃煞N途徑,一是向基因合成公司訂制,二是作本地基因合成。由于基因合成技術還沒有一個統一的方法,基因合成的技能和經驗在合成過程中具有決定性的影響,所以大部分基因合成都是在專業人員手中完成的,這也決定了途徑一是主要渠道。

  DNA基因合成儀合成技術原理:
  采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA的片段,它具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體.上完成DNA鏈的合成的,合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的,相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接。

  DNA基因合成儀反應步驟:
  1.將預先連接在固相載體CPG上的活性基團被保護的核苷酸與三氯*酸反應,脫去其5'-羥基的保護基團DMT ,獲得游離的5'-羥基。
  2.亞磷酰胺保護的核苷酸單體, 與活化劑四氮唑混合.得到核苷亞磷酸活化中間體. 它的3'端被活化,與CPG載體上連接堿基的5'-羥基發生縮合反應。
  3.帶帽(capping)反應??s合反應中會有少量5"-羥基沒有參加反應.用乙酸酐和1-甲基咪唑封閉5"-羥基,使其不能再繼續發生反應,這種短片段在純化時可以分離去除。
  4.在氧化劑碘的作用下,亞磷酰形式轉變為更穩定的磷酸三酯。


DNA基因合成儀

 

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